CEInfinite質量スペクトル直結型全カラムイメージング等の電気集束iCIEF

CEInfinite質量スペクトル直結型全カラムイメージング等の電気集束iCIEF

CEInfinte質量分析直列型全カラムイメージング等の電気集束iCIEF

CEInfinite iCIEF-MS オンラインカウルピングプラットフォーム

蛋白質生物製品の開発と生産において、翻訳後修飾（PTMs）と分解し、標的タンパク質の電荷を発生させる異機種混在体。バイオ製薬会社キャピラリ等の電気集束による（CIEF）とイメージングCIEF（iCIEF）を用いて電荷異性体を定量化する。生体電荷異性体の特性化は、細胞系選択、安定性研究、処方、およびプロセス制御するが、この特性化にはタンパク質を十分な純度を持つ単一の電荷に分離する必要がある異性体の留分を使用して下流解析に使用します。

さらに、特徴づけのための質量分析計（MS）へのiCIEFの直接結合は特徴づけプロセスを著しく簡略化する。

AESはCEInfinite製造型iCIEFシステムと独自の全カラムイメージング検出（WCID）分離カラムを開発し、iCIEF-WCIDの分離とMSとのオンライン結合に使用し、分離フォーカス（iCIEF）動態及びその後の分離電荷異性体ピークの移動過程をリアルタイムで観察することができる。圧力移動中、電場は分離キャピラリー中の試料に焦点を合わせたままにする。分離毛細管の内径は大きく、輸送毛細管の内径は小さい。したがって、この内径の差は、分離されたタンパク質異性体の小柱から離れる際の拡散と再混合を大きく減少させる。

詳細

CEInfinite iCIEF-MSのハイライト

• iCIEF-MSは、Thermo Fisher Scientific、Waters、Brukerの従来の低流量または高感度ナノフローESIと直接併用されています。

• 任意の緩衝液または溶液を補充液として使用することができる。化学移動には関与しない。タンパク質電荷変異体はpIに応じてMSに順次導入される。
  

• CE−MSは、既存のiCIEFまたはCIEF方法のいずれかから直接変換することができる。低濃度でも高濃度でも良好な分離度が得られた。

NIST mAbサンプルのiCIEF-MS分析

iCIEF−UV（赤）とiCIEF−MS（青）は電荷異性体のProfileを明確に観察することができ、すべての変異体ピークの優れたMSスペクトルを得ることができ、これによりほとんどの完全なNIST mAb電荷変異体をデコンボリューションすることができる。

その結果、塩基性ピークB 1とB 2は主にC端リジンの異性化によるものであり、酸性ピークA 1の分子量と主ピークの差は小さく、脱アミドなどの修飾によるものである可能性があり、調製型iCIEFによるさらなる研究と確認が必要であることが明らかになった。

お客様からの評価：

“iCIEFは、バイオ製薬の開発過程における電荷変化の監視に重要な役割を果たしている。CEInfiniteにより、iCIEFで検出された生成物変異体の質量読み取りを得ることができ、これは電荷変異体の化学的性質を理解するのに大いに役立つ。CEInfiniteとOrbitrap MSシステムが提供する高分解能精密質量分析を組み合わせて使用すると、製品変異体と製品安定性の詳細な理解を得ることができる。

簡単に言えば、CEInfiniteを使用したiCIEF-MSはバイオ製薬開発における非常に強力な特徴づけツールである。"

-Dan Bach Kristensen博士

Symphogenチーフ・サイエンティスト